مرحله 1: جمع آوری مواد برای شروع، تمام مواد لازم برای انجام کروماتوگرافی ساده را جمع آوری کنید. این شامل:

• کاغذ کروماتوگرافی یا کاغذ فیلتر
• حلال (مانند آب یا الکل)
• مداد یا خودکار
• مخلوط نمونه مورد تجزیه و تحلیل
• حاکم
• گیره لباس یا گیره کاغذ

مرحله 2: کاغذ کروماتوگرافی را آماده کنید یک نوار از کاغذ کروماتوگرافی یا کاغذ صافی را به اندازه دلخواه ببرید. توصیه می شود از نواری استفاده کنید که به اندازه کافی بلند باشد تا به ته ظرفی که برای فرآیند کروماتوگرافی استفاده می کنید برسد.

مرحله 3: ترسیم خط پایه با بهره‌گیری از یک مداد یا خودکار، یک خط مستقیم در نزدیکی پایین کاغذ کروماتوگرافی بکشید. این خط خط پایه نامیده می شود و به عنوان نقطه مرجع برای اندازه گیری مسافت طی شده توسط اجزای مخلوط در طول کروماتوگرافی عمل می کند.

مرحله 4: بهره‌گیری از نمونه با بهره‌گیری از قطره چکان یا لوله مویرگی، یک نقطه کوچک از مخلوط نمونه را روی خط پایه قرار دهید. مطمئن شوید که لکه متمرکز است اما خیلی بزرگ نیست، زیرا ممکن است در روند جداسازی اختلال ایجاد کند.

مرحله 5: آماده سازی حلال بر اساس ماهیت مخلوط نمونه و اجزای آن، یک حلال مناسب انتخاب کنید. حلال های رایج مورد استفاده در کروماتوگرافی ساده شامل آب، اتانول یا مخلوطی از هر دو است. ظرفی مانند یک لیوان یا شیشه شیشه ای را با حلال کافی پر کنید تا قسمت پایینی کاغذ کروماتوگرافی غوطه ور شود.

مرحله 6: کاغذ را غوطه ور کنید کاغذ کروماتوگرافی را در ظرف قرار دهید و مطمئن شوید که نقطه مخلوط نمونه بالاتر از سطح حلال باشد. از یک گیره لباس یا گیره کاغذ برای آویزان کردن نوار کاغذی در ظرف استفاده کنید و اجازه دهید آزادانه بدون تماس با طرفین آویزان شود.

مرحله ۷: صبر کنید تا جداسازی اجازه دهید فرآیند کروماتوگرافی بدون مزاحمت ادامه یابد. همانطور که حلال از نوار کاغذ بالا می رود، اجزای مخلوط نمونه را با سرعت های مختلف بر اساس حلالیت و تمایل آنها به کاغذ حمل می کند. این منجر به تشکیل نوارها یا لکه های مشخصی بر روی کاغذ کروماتوگرافی می شود.

مرحله 8: کاغذ را بردارید هنگامی که قسمت جلویی حلال به بالای نوار کاغذی رسید، آن را با احتیاط از ظرف خارج کنید. مراقب باشید که قطعات جدا شده را لمس یا لکه نکنید.

مرحله 9: علامت جلوی حلال در حالی که کاغذ کروماتوگرافی هنوز مرطوب است، خطی را در نقطه ای که جلوی حلال رسیده است علامت بزنید. این به اندازه گیری مقادیر Rf (ضریب حفظ) در طول تجزیه و تحلیل کمک می کند.

مرحله 10: تجزیه و تحلیل نتایج اجازه دهید کاغذ کروماتوگرافی کاملا خشک شود. اجزای جدا شده را بر اساس موقعیت آنها بر روی نوار کاغذ بررسی و تجزیه و تحلیل کنید. مقادیر Rf را با تقسیم مسافت طی شده توسط هر جزء از نقطه شروع آن (خط پایه) بر مسافت طی شده توسط جبهه حلال محاسبه کنید.

نکاتی برای بهینه سازی:

1. حلال مناسبی را انتخاب کنید که جداسازی خوبی از اجزاء ایجاد کند.
2. برای دستیابی به جداسازی بهینه، با غلظت های مختلف نمونه آزمایش کنید.
3. در طول فرآیند کروماتوگرافی دمای ثابتی را حفظ کنید.
4. از ازدحام بیش از حد نقاط در خط پایه خودداری کنید، زیرا می‌تواند منجر به همپوشانی نوارها شود.
5. برای اطمینان از سازگاری و دقت نتایج، آزمایش‌ها را چندین بار تکرار کنید.

روش های جدید در کروماتوگرافی:

با گذشت زمان، پیشرفت ها و اصلاحات مختلفی در تکنیک های کروماتوگرافی انجام شده است که منجر به توسعه روش های جدید شده است. برخی از روش های جدید قابل توجه در کروماتوگرافی عبارتند از:

1. کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا (HPLC): این تکنیک از پمپ های فشار بالا برای بهبود کارایی و سرعت جداسازی استفاده می کند. این به طور گسترده در تجزیه و تحلیل دارویی و کنترل کیفیت استفاده می شود.
2. کروماتوگرافی گازی (GC): GC ترکیبات فرار را بر اساس تبخیر و برهمکنش آنها با فاز ساکن جدا می کند. معمولاً در تجزیه و تحلیل پزشکی قانونی و نظارت محیطی استفاده می شود.
3. کروماتوگرافی لایه نازک (TLC): مشابه کروماتوگرافی ساده، TLC از یک لایه نازک فاز ثابت که روی یک صفحه شیشه ای یا ورق پلاستیکی پوشانده شده است استفاده می کند. این اجازه می دهد تا برای rتجزیه و تحلیل apid و اغلب در غربالگری دارو و تشخیص باقیمانده آفت کش ها استفاده می شود.

منابع :

1. شیمی تجزیه - یک مجله علمی که جنبه های مختلف شیمی تجزیه را پوشش می دهد، از جمله تکنیک های کروماتوگرافی.
2. Journal of Chromatography A - این مجله بر پیشرفت در تکنیک های کروماتوگرافی و کاربردهای آنها تمرکز دارد.
3. SciFinder - یک ابزار تحقیقاتی آنلاین که دسترسی به مجموعه وسیعی از متون علمی، از جمله مقالات مرتبط با کروماتوگرافی را فراهم می‌کند.